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elisa試劑盒白介素類實(shí)驗(yàn)時(shí)常出現(xiàn)的錯(cuò)誤及對(duì)策
更新時(shí)間:2017-06-15   點(diǎn)擊次數(shù):1047次

elisa試劑盒白介素類異常:白板

結(jié)果描述:顯色步驟結(jié)束后酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對(duì)照不顯色。

原因分析:試劑已過有效期,或不同試劑盒組分混用,檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。

elisa試劑盒白介素類對(duì)策:不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用。
整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯(cuò)加其他試劑造成,如同時(shí)操作兩對(duì)半試劑時(shí),測HbsAb板用于測HBsAg等;實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)所有組分均屬于對(duì)應(yīng)的試劑盒。如盛標(biāo)本的試管四周常有血痂,易脫落,應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。elisa試劑盒超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào);試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行留存,受高溫影響;實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)試劑未過期。孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃,孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作,保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫?;ò?,一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和留存方法不當(dāng)造成,放置時(shí)間(自 然放置 1~2h)及離心轉(zhuǎn)(3000r/min)、離心時(shí)間(15min)應(yīng)引起注意。試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平 衡,20分鐘左右。錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B 嚴(yán)格按說明書的步驟操作,加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致,以減少漏加現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,陰陽性對(duì)照正常,質(zhì)控正常,但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱,待測 標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽性標(biāo)本,故結(jié)果可能是正常的,如有懷疑,可復(fù)檢標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑,酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑,可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑,陰陽性對(duì)照正常,但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽性標(biāo)本未能檢出。
  
不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能 混用酶標(biāo)對(duì)吸頭的污染以及對(duì)盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現(xiàn)象;避免試劑組分間的交叉污染,確保吸頭、容器的干凈,顯色劑在光照條件下放置過久,實(shí)驗(yàn) 前已變藍(lán),顯色劑A、B未使用前避光留存,孵育溫度過高或孵育時(shí)間過長;孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃,孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的,可存于 2-8℃,如需長期留存,應(yīng)置于-20℃以下留存。不要將elisa試劑盒長 時(shí)間置于常溫下,按使用規(guī)定儲(chǔ)藏。出現(xiàn)隨機(jī)性的花板、跳孔現(xiàn)象 樣品離心不*,反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血或殘留細(xì)胞成分; 充分離心, 3000rpm6分鐘以上。儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配,重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù),特別是檢查濾光片是否匹配,靈敏度過高、板底高、高背景 終止后,整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色;或陰陽性對(duì)照、質(zhì)控正常,標(biāo)本陰性標(biāo)本,OD值過高。特別是洗滌時(shí)每孔未注滿洗液,易造成花板黃板現(xiàn)象,嚴(yán)格按 說明書要求洗板。洗板及加樣過程中,酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力,確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。加樣時(shí)交叉污染; elisa試劑盒白介素類加標(biāo)本時(shí)盡量 避免交叉污染。

 

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