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PCR檢測(cè)試劑盒使用時(shí)有哪些地方是需要我們注意的?
更新時(shí)間:2021-11-24   點(diǎn)擊次數(shù):740次
  PCR檢測(cè)試劑盒使用時(shí)有哪些地方是需要我們注意的?
  PCR檢測(cè)試劑盒利用DNA擴(kuò)增的線性原理,可以測(cè)定樣品中已知序列的絕對(duì)或相對(duì)量。qPCR會(huì)監(jiān)測(cè)每個(gè)PCR循環(huán)中的DNA擴(kuò)增。當(dāng)DNA處于對(duì)數(shù)線性擴(kuò)增階段時(shí),熒光量相對(duì)于背景增加。熒光積累至可測(cè)的那一點(diǎn)稱為閾值循環(huán)(CT)或交叉點(diǎn)。通過(guò)使用已知量的標(biāo)準(zhǔn)DNA的多次稀釋,可以產(chǎn)生對(duì)比CT的對(duì)數(shù)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后可以從其CT值計(jì)算未知樣品中DNA或cDNA的量。適用于多色熒光PCR儀。
  PCR檢測(cè)試劑盒的使用注意事項(xiàng):
  1.實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū),嚴(yán)格按步驟執(zhí)行,不使用檢測(cè)試劑盒提供的組份或不按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。
  2.所有試劑應(yīng)在規(guī)定溫度儲(chǔ)存。-20℃保存的試劑在使用前應(yīng)充分混勻。試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過(guò)5次。
  3.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)按照國(guó)家有關(guān)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范執(zhí)行,實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)分區(qū)(試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)),各區(qū)物品為專用,不得交叉使用,避免污染。
  4.操作臺(tái)、移液器、離心機(jī)等儀器用品應(yīng)經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進(jìn)行消毒。耗材應(yīng)進(jìn)行無(wú)酶處理。
  5.待檢樣本、試劑盒組份及實(shí)驗(yàn)中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進(jìn)行處理。
  6.為防止熒光干擾,應(yīng)避免使用含熒光物質(zhì)的手套,避免用手直接接觸,預(yù)防交叉污染。
  7.檢測(cè)結(jié)果為陰性,并不*代表為非感染狀態(tài),具體診斷需結(jié)合獸醫(yī)臨床。
  8.產(chǎn)生假陰性的可能原因?yàn)椋捍龣z樣本在采集、運(yùn)輸、保存及核酸提取過(guò)程中操作不當(dāng)造成DNA降解;樣本中核酸濃度低于z低檢測(cè)限;病毒待測(cè)靶基因出現(xiàn)變異;未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾因素。
  9.產(chǎn)生假陽(yáng)性的可能原因?yàn)椋捍龣z樣本采集、運(yùn)輸及核酸提取過(guò)程中發(fā)生交叉污染。
 

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